一、操作因素

1.滅菌不徹-底

高壓蒸汽滅菌參數(shù)錯誤：溫度、壓力或時間未達(dá)標(biāo)（如121℃未維持15分鐘），導(dǎo)致耐熱孢子存活。

滅菌后冷卻不當(dāng)：過早打開滅菌鍋或未充分冷卻，引發(fā)冷凝水污染。

滅菌物品超載：過多培養(yǎng)基或容器堵塞滅菌鍋，影響蒸汽穿透。

2.無菌操作失誤

超凈臺污染：紫外燈未定期更換、氣流紊亂或操作者動作過大，帶入環(huán)境微生物。

操作前未消毒：手部、工具或容器表面未用酒精擦拭，直接接觸培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基暴露時間過長：在開放環(huán)境中傾倒或分裝，增加污染風(fēng)險。

三、接種技術(shù)問題

接種量控制不當(dāng)：菌液濃度過高或過低，影響菌落生長密度。

接種工具污染：移液管、接種環(huán)未徹-底滅菌或冷卻。

交叉污染：同一工具接種不同菌種，未及時更換或滅菌。

二、環(huán)境因素

1.實驗室環(huán)境不達(dá)標(biāo)

空氣潔凈度不足：超凈臺HEPA過濾器失效或未定期更換，導(dǎo)致微粒或微生物進(jìn)入。

溫濕度失控：培養(yǎng)箱溫度波動（如±2℃超出范圍）或濕度不足，影響菌落形態(tài)。

氣流干擾：人員頻繁進(jìn)出、設(shè)備振動或空調(diào)直吹，導(dǎo)致局部污染。

2.儲存條件不當(dāng)

培養(yǎng)基未冷藏：液體培養(yǎng)基在室溫下長期存放，引發(fā)微生物滋生。

干燥劑失效：固體培養(yǎng)基未密封或干燥劑未及時更換，導(dǎo)致水分吸收或結(jié)塊。

三、材料因素

1.培養(yǎng)基質(zhì)量問題

成分偏差：pH值未校準(zhǔn)（如TSA培養(yǎng)基pH應(yīng)為7.2±0.2）、營養(yǎng)物缺失或過量。

添加劑失效：抗生素、指示劑等未按標(biāo)準(zhǔn)添加或儲存不當(dāng)。

過期或變質(zhì)：超過有效期或出現(xiàn)沉淀、變色等異常現(xiàn)象。

2.菌種問題

菌種退化：傳代次數(shù)過多或保存條件不當(dāng)，導(dǎo)致菌落形態(tài)變異。

菌種污染：保藏菌種混入雜菌，未做純化驗證。

菌種特性不符：誤用非標(biāo)準(zhǔn)菌種（如用大腸桿菌替代金黃色葡萄球菌）。

四、記錄與驗證因素

1.記錄缺失或錯誤

未記錄關(guān)鍵參數(shù)：滅菌時間、溫度、菌種稀釋度等未詳細(xì)記錄，導(dǎo)致無法追溯。

數(shù)據(jù)篡改或遺漏：人為修改結(jié)果或未記錄異常現(xiàn)象（如培養(yǎng)基變色）。

2.驗證不足

未做陽性對照：未接種標(biāo)準(zhǔn)菌株驗證培養(yǎng)基活性，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

陰性對照污染：空白培養(yǎng)基出現(xiàn)菌落，未排查污染源。

五、其他因素

1.設(shè)備故障

培養(yǎng)箱溫度失控：傳感器故障或校準(zhǔn)過期，導(dǎo)致實際溫度與顯示不符。

滅菌鍋壓力異常：壓力表損壞或未定期校準(zhǔn)，影響滅菌效果。

2.人員培訓(xùn)不足

操作不規(guī)范：未掌握無菌技術(shù)要點（如火焰滅菌距離、接種環(huán)冷卻時間）。

應(yīng)急處理缺失：對污染或異常結(jié)果無明確處理流程。

六、系統(tǒng)性改進(jìn)建議

標(biāo)準(zhǔn)化操作：制定SOP并定期培訓(xùn)，確保滅菌參數(shù)、接種量等精確執(zhí)行。

環(huán)境監(jiān)控：定期檢測超凈臺氣流、溫濕度，并記錄校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。

材料驗證：每批培養(yǎng)基使用前做性能測試（如無菌檢查、促生長試驗）。

記錄追溯：完善電子記錄系統(tǒng)，確保數(shù)據(jù)可追溯且防篡改。