1）電解質 抗原抗體結合后由親水膠體變為疏水膠體，此時易受電解質影響。通常在抗原抗體反應中，以8.5g/L NaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反應液，其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷，使膠體顆粒的電勢下降，形成可見的沉淀物或凝集物。若無電解質存在，則不出現可見反應。但如果電解質濃度過高，則會出現非特異性蛋白質沉淀，即鹽析。

　　2）酸堿度 pH過高或過低都可影響抗原和抗體的理化性質。例如，當pH為3左右時，可出現非特異性酸凝集。此時因接近細菌抗原的等電點，細菌表面蛋白或其他基團所帶的電荷消失，其間互相的排斥力喪失而導致凝集，影響試驗的可靠性。抗原抗體反應一般以pH6～pH9為宜。

　　3）溫度 抗原抗體反應zui適溫度為37℃。一般在15℃～40℃范圍內進行，在此范圍內，溫度越高，分子運動速度加快，增加抗原抗體接觸機會，反應速度越快，但亦容易引起復合物解離;溫度越低，反應速度緩慢，但抗原抗體結合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應需要特定的溫度，如冷凝集素在4℃時與紅細胞結合，20℃以上反而解離。